Визначення резус-фактора крові: як дізнатися його експрес-методом

Спостереження лікарів протягом багатьох років показують, що білок Rh на організм і його здоров’я надає певний вплив, надаючи окремі додаткові властивості. Інакше кажучи, люди з негативним резусом фізіологічно дещо відрізняються від тих, у кого цей параметр позитивний. Він передається від батьків і не змінюється все життя.

Що таке резус фактор

Це показник крові, що відображає наявність або відсутність червоних клітин білка Rh. Він є в еритроцитах в основному у всіх людей. Однак приблизно у 15% цього особливого білка немає. Показник абсолютно не впливає на якість або кількість біологічного матеріалу — кров. Хворому з негативним резусом можна переливати кров тільки з таким же резусом. В іншому випадку при попаданні позитивного білка, починається вироблення антитіл, здоров’я людини буде в небезпеці. А переливати хворому з позитивним резусом кров з негативним резусом допускається.

Якщо у батька Rh «+», матері Rh «-», а у плода резус як у тата, кров вагітної мами сприймає плід як чужорідне тіло. В результаті резус конфлікту, здоров’ю малюка загрожують серйозні проблеми. Може трапитися навіть викидень.

У вирішенні даної ситуації сучасна медицина просунулася далеко. Якщо резуси не збігаються, вагітна повинна здавати кров щомісяця. Це дозволить дізнатися наявність антитіл. При їх виявленні буде призначена спеціальна терапія.

Для визначення резус фактора крові проводять певні дослідження.

особливості підготовки

Процедура не відрізняється від забору біологічного матеріалу для проведення загального аналізу. Медсестра набирає в пробірку невелику кількість крові з вени, після цього її запечатують і маркують. При взятті зразка пацієнт майже не відчуває болю. На процедуру йде кілька хвилин. Перед дослідженням не потрібно дотримуватися суворий режим, однак є деякі винятки.

Увага !

Здавати кров можна після того, як пройде 4 години після вживання їжі.

Якщо людина приймає лікарські препарати, необхідно повідомити лікаря. Є медикаменти, які впливають на результат.

способи визначення

Існують лабораторні та клінічні методи. Вони розрізняються вдосконаленням, наявністю обладнання, спеціально призначеного для цих цілей, і часом, за яке необхідно зробити дослідження. Для визначення резус фактора можуть використовувати різні способи:

• за допомогою Цоліклони;
• експрес-метод в пробірках без підігріву;
• на чашках Петрі;
• за допомогою желатину.

Майже всі сучасні лабораторні тести дають 100% -нвй результат. На достовірність можуть вплинути невідповідні умови, в яких проводиться процедура.

А саме якщо в несправному стані буде термостат або в те місце, де відбувається хімічна взаємодія, потраплять сторонні хімічні реагенти.

Від кваліфікації лаборанта, що виконує процедуру, і чистоти лабораторії залежить точність дослідження.

Експрес-метод

Резус визначається експрес-методом, при якому використовують універсальну для всіх груп крові сироватку, що має назву антирезус. Кров беруть з пальця, потім на дно пробірки капають 1 краплю необхідної сироватки і стільки ж досліджуваного біоматеріалу. Обережно перемішують, через 3 хвилини туди додають 2 мл фізрозчину. 3 рази акуратно перевертають. І починають читати отриманий результат. Якщо відбувається аглютинація — Rh позитивний, якщо вона спостерігається — позитивний.

чашки Петрі

Для того щоб визначити резус даними способом, будуть потрібні:

• чашки Петрі;
• ізотонічний розчин натрію хлориду;
• піпетки;
• стандартні сироватки для кожної групи крові.

Лаборант капає в 3 ряди поруч по 2 краплі реагенту 2-х серій, в кожну додає краплю крові, взяту для дослідження, а також контрольні негативні і позитивні еритроцити. Обережно змішує, і відправляє на водяну баню на 10 хвилин.

Результат залежить від того, є чи ні пластівців, які створюють злиплі еритроцити. Якщо склеювання не сталося, то визначається біоматеріал має негативний резус, при нещодавно трапився злипанні можна говорити про позитивний чинник Rh.

Цоліклони

Дізнатися резус можна, використовуючи Цоліклони, які відносяться до моноклональних реагентів. Визначення відбувається в процесі реакції аглютинації, коли в присутності електроліту під впливом антитіл склеюються і випадають в осад різні клітини, в тому числі і еритроцити. Процедуру виконують в добре освітленій кімнаті. Для того, щоб провести тест знадобиться цільна кров, відмиті еритроцити або ті, які присутні в консерванті, плазмі, сироватці.

Більш достовірний результат можна отримати, використовуючи еритроцити високої концентрації. Для реакції беруть пластину, підігріту до 37 градусів. На неї капають за допомогою піпетки приблизно 0,1 мл реагенту, поруч з ним 0,01 мл. еритроцитів або крові.

Скляною паличкою ці 2 компонента акуратно перемішують, похитуючи кожні півхвилини тарілку, лаборант візуально спостерігає за реакцією. Вона починається через чверть години, в активну фазу входить через хвилину, однак результат беруть до уваги лише через 3 хвилини.

Якщо еритроцити не випадають в осад — резус негативний, склеювання і випадання червоних клітин у вигляді пластівців свідчить про позитивний резус. Реакція видно неозброєним оком.

желатин

Щоб визначити резус-фактор, нерідко вдаються до використання желатинового експрес-методу.

При процедурі до крові додають 10% розчин желатину в кількості 1 краплі, пробірку поміщають на 10 хвилин в сприятливі умови з температурою в 37 градусів, додають теплий ізотонічний розчин хлориду натрію. Вміст обережно перемішують.

Желатин відноситься до речовин, які допомагають зникнення неспецифічної реакції еритроцитів. В екстрених ситуаціях можна застосовувати будь-який з методів визначення резус фактора.

Увага !

Перед переливанням крові обов’язково повинні бути проведені проби на сумісність.

Процедуру виконують навіть, якщо є дані про те, що групи крові хворого і донора ідентичні.

розшифровка результатів

Взяття аналізу по визначенню резусу займає мало часу, виконується досить швидко. Його результат вказують на першому аркуші історії хвороби, у донорів дані можуть бути внесені в паспорт. Якщо позитивний Rh не вимагає уважного ставлення, то з негативним треба бути більш уважним. При попаданні в лікарню для проведення операції або при необхідності переливати кров, обов’язково треба повідомляти про нього лікаря. В основному перед хірургічним втручанням медики проводять контрольний аналіз, при не збігу з наявними результатами, його проводять ще раз.

Кожна людина повинна знати свою групу крові і резус-фактор, оскільки може стати в нагоді в будь-який момент. Особливо це стосується жінок, які планують народити дитину. Відсутність резус-фактора — це не захворювання.

Його враховують лише в період вагітності у жінок з негативним Rh. Сучасна медицина допомагає вчасно визначити резус, щоб дитина народилася здоровою і без патології.

Для отримання правильного та достовірного результату слід звертатися в хорошу лабораторію, яка працює згідно з належними вимогам.

Як дізнатися резус-фактор крові?

Резус-фактор — один з параметрів крові, який відображає присутність або відсутність на мембранах червоних клітин особливого білка Rh. У разі, якщо він є, кров резус-позитивна і позначається Rh +, при його відсутності резус-негативної — Rh-.

Цей білок є на еритроцитах більшості живуть на планеті, але приблизно у 15% його немає. Його відсутність або присутність ніяк не позначається на здоров’ї. Rh передається від батьків і протягом усього життя залишається незмінним.

Коли здають аналіз на Rh

Ще радимо: Резус-фактор і резус-конфлікт

Визначення резус-фактора відбувається під час аналізу крові на групу. Ця інформація необхідна при переливанні, при підготовці до хірургічного втручання і в період виношування плоду.

Під час вагітності може статися конфлікт між кров’ю майбутньої матері і кров’ю дитини. Знаючи про те, що жінка резус-негативна, лікарі можуть заздалегідь вжити заходів, щоб уникнути конфлікту і зберегти здоров’я резус-позитивного плода.

Здати кров на резус можна в лабораторії будь поліклініки або в стаціонарі. Для дослідження роблять забір з пальця або з вени.

як визначають

Методів визначення Rh кілька:

• На чашках Петрі методом конглютинації.
• За допомогою Цоліклони.
• Експрес-методом в пробірках без підігріву.
• Желатиновим методом.

Суть аналізу полягає у виявленні антигену D за допомогою антирезусних сироваток або моноклональних реагентів (Цоліклони) в реакції аглютинації (склеювання еритроцитів і освіти пластівців) в пробірках або на площині.

Комплекс препаратів для визначення Rh-приналежності

На чашках Петрі

Для визначення резус-фактора знадобляться чашки Петрі, індивідуальні піпетки, розчин натрію хлориду ізотонічний, сироватки стандартні для всіх груп крові. Порядок проведення:

1. Капають поруч по дві краплі реагенту двох серій для трьох досліджень (в три ряди).
2. У кожну із серій додають по краплі досліджуваної крові і еритроцитів (контрольних позитивних і контрольних негативних).
3. Перемішують, на десять хвилин ставлять чашку на водяну баню (47 ° C).
4. Результат визначають по наявності або відсутності пластівців (злиплих еритроцитів). Якщо червоні клітини склеїлися, Rh позитивний, якщо злипання не відбулося, Rh негативний.

Визначення Rh-приналежності Цоліклони

Щоб дізнатися резус-фактор, застосовують моноклональні реагенти — Цоліклони, які отримують методом генної інженерії з асцитної рідини мишей. Rh визначається під час реакції аглютинації, яка відбувається на площині.

Процедура повинна проводитися в приміщенні з хорошим освітленням. Для тіста беруть цільну кров, еритроцити, що знаходяться в сироватці, плазмі, фізрозчин або консерванті, або відмиті еритроцити. Для отримання кращого результату потрібні еритроцити високої концентрації, а пластинка, на якій буде відбуватися реакція, підігрівається до 37 ° C.

1. На планшет індивідуальної піпеткою капають велику краплю реагенту (приблизна кількість — 0,1 мл).
2. Близько реагенту капають досліджувану кров (маленьку краплю) або еритроцити в кількості 0,01 мл.
3. За допомогою скляної палички як слід змішують реагент і кров і кожні 30 секунд тарілку похитують протягом трьох хвилин, спостерігаючи за реакцією візуально.
4. Реакція аглютинації починається через 15 секунд, явно вираженою стає через 1 хвилину, але результат враховують тільки через три хвилини.

Якщо почалася реакція аглютинації (склеювання еритроцитів і випадання їх в осад), кров маркують резус-позитивною, якщо злипання червоних клітин не спостерігається, резус-фактор негативний. Склеєні еритроцити, які представляють собою пластівці, видно неозброєним оком.

Результат трактується в залежності від того, чи відбулася аглютинація червоних клітин

Експрес-метод

В якості реагенту застосовується сироватка під назвою «антирезус», яка є універсальною для всіх груп крові.

1. У пробірку поміщають краплю крові (еритроцитів) в кількості 0,05 мл, потім додають 2 краплі реагенту «антирезус».
2. Пробірку повертають, що не струшуючи, щоб вміст перемішалося і рівномірно розтеклося по склу.
3. Приблизно через три-п’ять хвилин відбувається склеювання еритроцитів.
4. Щоб виключити агрегацію червоних клітин, в пробірку додають розчин ізотонічний NaCl в кількості 2-3 мл і кілька разів перевертають пробірку, щоб вміст перемішалося.
5. Після цього зчитують результат. Якщо з’явилися пластівці на тлі більш світлої рідини, Rh позитивний, якщо пластівців немає, рідина забарвлена ​​рівномірно в рожевий колір, Rh — негативний.

Потрібно сказати, що універсальні сироватки можуть дати хибно позитивну реакцію з Rh-негативними еритроцитами.

Може статися неспецифічне склеювання червоних клітин, на поверхні яких є інші антитіла — НЕ атірезус. Тому паралельно проводять тестування з контрольним розчином підсилювача.

Якщо після введення контрольного розчину відбувається аглютинація, результат вважається недостовірною, і тестування повторюють з іншим реагентом.

Пробірочний метод визначення Rh

Із застосуванням желатину

Ця методика заснована на застосуванні желатину (у вигляді розчину 10%). Для тестування використовуються і стандартні антирезусні реагенти, і Цоліклони.

1. В пробірку капають одну краплю крові (0,05 мл) або еритроцитів у вигляді суспензії в сироватці (50%).
2. Потім 2 краплі підігрітого заздалегідь до рідкого стану розчину желатину.
3. Далі 2 краплі реагенту, потім змішують.
4. Пробірку ставлять на п’ять-десять хвилин на водяну баню (47 ° C) або на півгодини в сухий термостат з такою ж температурою.
5. Потім в пробірку додають фізіологічний розчин (5-8 мл), закривають кришкою і обережно повертають два-три рази, щоб перемішати.
6. Для визначення наявності пластівців вміст пробірки оглядають неозброєним оком на світло або через збільшувальне скло.

При використанні желатину не відбувається неспецифічної аглютинації. Після проведення такої проби необхідні контрольні тести:

• зі стандартними Rh + еритроцитами;
• зі стандартними Rh- еритроцитами;
• з досліджуваної кров’ю (еритроцитами) і желатином.

висновок

Інформація про резус-факторі необхідна в разі переливання крові. Для гемотрансфузії може бути використана тільки сумісна по групі і по резус кров. Крім цього, слід визначити резус-фактор під час вагітності. Ще краще пізнати його на етапі її планування. Це необхідно, щоб запобігти резус-конфлікт між Rh-позитивним плодом і Rh-негативною жінкою.

Визначення групи крові: Цоліклони, стандартні сироватки і перехресний спосіб

Визначення групи крові і резус-фактора діляться на два способи:

Експрес-діагностика (первинне визначення групи крові і Rh-фактора) не враховує антигени Келл , не кажучи вже про інші системи верифікації. Тому Цоліклони застосовують тільки для первинного визначення групи крові і резус-фактора і при екстрених показаннях трансфузии компонентів крові.

Детальніше про саму рідкої групи крові в Світі можна знайти тут .

Визначення групи крові і резус-фактора Цоліклони анти-А, анти-В і Анти-D супер є найбільш сучасним і відносно простим методом. Для визначення групи крові використовуються Цоліклони, тобто моноклональні антитіла.

• Що потрібно для визначення групи крові і резус-фактора?
• — Цоліклони анти-А ;
• — Цоліклони анти-В ;
• — Цоліклони анти-D ;
• — розчин натрію хлориду 0,9%; спеціальний планшет; стерильні палички.

Алгоритм і порядок визначення групи крові

Нанести Цоліклони анти-А, анти-В на спеціальний планшет по одній великій краплі (0,1 мл), під відповідними написами.

Поруч з ними капнути досліджувану кров (0,01-0,03 мл) по одній маленькій краплі. Перемішати їх і спостерігати за настанням або відсутністю реакції аглютинації протягом 3 хв. При сумнівному результаті додати 1 краплю 0,9% фізіологічного розчину.

Розшифровка результатів визначення групи крові

• якщо реакція аглютинації наступила з анти-А Цоліклони, то досліджувана кров належить до групи А (II);
• якщо реакція аглютинації наступила з анти-B Цоліклони, то досліджувана кров належить до групи B (III);
• якщо реакція аглютинації не наступила з анти-А і з анти-B Цоліклони, то досліджувана кров належить до групи 0 (I);
• якщо реакція аглютинації наступила з анти-А і з анти-B Цоліклони, то досліджувана кров належить до групи AB (IV), як показано на малюнку.

Визначення резус-фактора Цоліклони Анти- D

На планшеті змішують велику краплю (0,1 мл) анти-D Цоліклони і маленьку краплю (0,01 мл) досліджуваної крові пацієнта. За настанням реакції аглютинації або її відсутністю спостерігають протягом 3 хв.

• якщо реакція аглютинації наступила з Цоліклони анти-D, то досліджувана кров належить до резус-позитивної (Rh +)
• якщо реакція аглютинації не наступила з Цоліклони анти-D, то досліджувана кров належить до резус-негативної (Rh-)

Іншими словами, при змішуванні Цоліклони Анти-D з резус-позитивними еритроцитами настає реакція аглютинації, а якщо кров резус-негативна — аглютинація відсутня (як показано на малюнку — четверта група крові резус-негативна ).

Визначення груп крові стандартними ізогемагглютінірующіх сироватками — пошук і виявлення в крові антигенів А і В за допомогою реакції аглютинації. Для досягнення мети використовують:

• Стандартні ізогемагглютінірующіх сироватки груп крові О (I) — безбарвна, А (II) — синя, В (III) — червона, АВ (IV) — жовта.
• Білі тарілки, марковані групами крові: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
• NaCl 0,9%
• скляні палички

1. Підписати тарілку (П.І.Б. пацієнта);
2. Нанести позначення двох серій стандартних сироваток I, II і III груп крові в обсязі 0,1 мл, що утворюють два ряди по три краплі зліва направо: 0 (I), А (II), В (III);
3. Забрати кров з вени. Шість крапель досліджуваної крові пацієнта перенести скляною паличкою на пластину в шість точок поруч з краплею стандартної сироватки і перемішати.

Аглютинація почнеться через 30 сек. У ті краплі, де сталася аглютинація, додати по одній краплі NaCl 0,9% і оцінити результат.

Оцінка результатів визначення групи крові стандартними сироватками

Позитивна реакція аглютинації може бути пескообразной або пелюсткової. При негативній реакції крапля залишається рівномірно забарвленою в червоний колір. Результати реакцій в краплях з сироватками однієї і тієї ж групи (двох серій) повинні збігатися.

Належність досліджуваної крові до відповідної групи визначають за наявністю або відсутністю аглютинації при реакції з відповідними сироватками після спостереження протягом 5 хв.

При цьому слід зазначити, що якщо сироватки всіх трьох груп дали позитивну реакцію, це вказує на те, що випробувана кров містить обидва агглютиногена (А і В) і належить до групи AB (IV).

Однак в таких випадках для виключення неспецифічної реакції аглютинації необхідно провести додаткове контрольне дослідження випробуваної крові зі стандартною ізогемагглютінірующіх сироваткою групи AB (IV), що не містить аглютинінів. Лише відсутність аглютинації в цій краплі при наявності аглютинації в краплях, що містять стандартні сироватки груп 0 (I), А (II) і В (III), дозволяє вважати реакцію специфічної і віднести досліджувану кров до групи АВ (IV).

Визначення групи крові перехресним способом — виявлення наявності або відсутності в досліджуваній крові антигенів А і В за допомогою стандартних ізогемагглютінірующіх сироваток, а також антитіл α і β за допомогою стандартних еритроцитів . Реакцію зі стандартними сироватками проводять описаним вище способом.

Для реакції зі стандартними еритроцитами необхідні стандартні еритроцити трьох груп крові: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведення реакції зі стандартними еритроцитами

1. Кров для дослідження беруть з вени в пробірку, центрифугують або залишають на 30 хв для отримання сироватки.
2. На маркіровану тарілку наносять три великих краплі (0,1 мл) сироватки крові з пробірки, а поруч з ними по одній маленькій краплі (0,01 мл) стандартних еритроцитів груп.
3. Відповідні краплі змішують скляними паличками, планшет похитують, спостерігають протягом 5 хв, в краплі з агглютинацией додають NaCl 0,9% і оцінюють результат.

Оцінка результатів проведення реакції зі стандартними еритроцитами

Оцінюють результати, отримані зі стандартними ізогемагглютінірующіх сироватками і стандартними еритроцитами. Особливість результатів реакції зі стандартними еритроцитами — еритроцити групи 0 (I) вважають контрольними.

Результат перехресного способу вважають достовірним, якщо при реакції зі стандартними ізогемагглютінірующіх сироватками і зі стандартними еритроцитами відповіді про групу досліджуваної крові збігаються.

Якщо цього не відбувається, обидві реакції слід переробити.

Визначення резус фактора експрес методом за допомогою стандартного універсального реагенту без підігріву в пробірці

• Для визначення резус-фактора може бути використана свіжа НЕ згорнулася кров, взята з пальця безпосередньо перед дослідженням, або консервована, без будь-якої попередньої обробки, а також еритроцити з пробірки після утворення згустку і відстоювання сироватки.
• Техніка визначення.
• — 1 мл стандартного універсального реагенту (антирезусного сироватка групи AB (IV) + 33% розчин поліглюкіну);
• -1мл досліджуваної крові (еритроцитів)
• На дно пробірки внести 1 краплю стандартного універсального реагенту і 1 краплю досліджуваної крові (або еритроцитів).
• Вміст пробірки перемішати струшуванням і потім повільно повертати, нахиляючи пробірку майже до горизонталі таким чином, щоб вміст розтікався по її стінках. після 3-хвилинного погойдування,

для виключення неспецифічної агрегації еритроцитів в пробірку додати 2-3мл фізіологічного розчину хлористого натрію і перемішати, не збовтуючи, шляхом 2-3-х кратного перевёртиванія пробірки. Оцінку виробляти візуально.

1. Оцінка результату.
2. Резус — (+) -наявність аглютинації у вигляді великих пластівців з еритроцитів на тлі просвітленої рідини.
3. Резус — (-) -відсутність аглютинації (в пробірці гомогенно забарвлена ​​рідина).
4. Визначення резус-фактора за допомогою моноклонального реагенту (Цоліклони анти-d, анти-d супер).

Цоліклони анти-D супер випускається у флаконах по 2,5 або 10 мл (1 мл містить 10 доз). Термін зберігання — 1 рік в холодильнику при t 2 ~ 8 ° С. Розкритий флакон можна зберігати в холодильнику протягом місяця в закритому вигляді

• Наносять велику краплю (близько 0,1 мл) реагенту на платівку або планшет.
• Поруч поміщають маленьку краплю (0,01-0,05 мл) досліджуваної крові і змішують кров з реагентом.
• Реакція аглютинації починає розвиватися через 10-15 сек, чітко виражена аглютинація настає через 30-60 сек.
• Результати реакції зчитують через 3 хв.
• Тарілку після змішування реагенту з кров’ю рекомендується похитувати не відразу, а через 20-30 сек, що дозволяє за цей час розвинутися більш повної крупнолепестковой аглютинації.
• Метод аглютинації на чашках Петрі .
• — досліджувані еритроцити;
• -дві серії стандартних сироваток антирезус всіх груп системи АВО ;
• -контрольні зразки резус-позитивних і резус-негативних еритроцитів :
• -водяная лазня з постійною температурою 46-48 С °
• -чашкі Петрі

Наявність аглютинації свідчить про позитивний результат, відсутність її — про негативний. Для контролю в цьому методі використовують свідомо Rh-негативні і Rh-позитивні еритроцити.

Метод аглютинації з 10% желатином:

Реакція конглютинації з желатином зазвичай проводиться в пробірках ємністю 8-10 мл. У штатив встановлюють 2 ряди пробірок для двох різних серій стандартної сироватки.

У контрольні пробірки кожного ряду вводять по 1 краплі стандартних резус-позитивних і резус-негативних еритроцитів, в інші пари пробірок — досліджувані еритроцити.

Дослідження можна проводити як з відмитим, так і з неотмитимі еритроцитами.

Потім в кожну пробірку додають по одній краплі підігрітої до розрідження желатини (10% розчин) і по одній краплі стандартної сироватки.

Вміст пробірок змішують шляхом струшування і поміщають у водяну баню при t ° 46-48 ° на 5 хв.

, Після закінчення яких у кожну пробірку доливають 5-8 мл підігрітого до t ° 46-48 ° фізіологічного розчину NaCl і розглядають на світло, визначаючи наявність або відсутність аглютинації (рис. 2).

1. Метод аглютинації в сольовому середовищі.
2. При дослідженні сироваткою, що містить повні антитіла, застосовують метод аглютинації в сольовому середовищі в маленьких пробірках (висотою 2-2,5 см, діаметром 0,5 — 0,6 см).
3. У штатив встановлюють 2 ряди пробірок (за кількістю досліджуваних зразків і по 2 для контролю), в які вводиться по 2 краплі стандартної сироватки і по 1 краплі 2% суспензії еритроцитів, попередньо двічі відмитих фізіологічним розчином NaCl.
4. Вміст пробірок струшують і поміщають в термостат при t ° 37 ° на 1 годину.

Про резус-приналежності судять за формою осаду, який розглядають через лупу з 5-7-кратним збільшенням над джерелом світла, закритим матовим склом. Результати враховують в залежності від наявності або відсутності аглютинації в досліджуваних еритроцитах після перевірки контрольних зразків.

Визначення резус-належності крові

Розділ: Медицина> Фізіологія
Визначення резус-належності крові ЗА ДОПОМОГОЮ СТАНДАРТНИХ СИРОВАТОК ВИЗНАЧЕННЯ резус ПРИЛАДДЯ КРОВІ ЗА ДОПОМОГОЮ Цоліклони

Визначення резус-належності крові ЗА ДОПОМОГОЮ СТАНДАРТНИХ СИРОВАТОК

Поняття резус-фактор — занадто загальне (і застаріле). Система резус антигенів різноманітна. Сучасні методи дослідження дозволяють робити тести індивідуально по резусу D, С, с, Е, е. Крім цього, необхідно виявляти випадки зі слабким D-антигеном або варіабільності D-антигеном. Вся ця інформація теж вкрай важлива при підборі донора в разі потреби.

Хід роботи . Визначення резус-належності крові проводиться за допомогою стандартної універсальної сироватки «антирезус» для всіх груп крові. В пробірку вводять одну краплю (0,05 мл) досліджуваної крові або еритроцитів і додають 1-2 краплі стандартного універсального реагенту «антирезус» тієї ж групи крові.

Перешивають вміст шляхом струшування пробірки і поміщають її на водяну баню на 5 хвилин при температурі 370С, так як імунна реакція з антигеном вимагає оптимальної температури. Як правило, аглютинація настає протягом 3-5 хв.

Після закінчення цього часу для виключення неспецифічної агрегації еритроцитів в пробірку додають 2-3 мл ізотонічного розчину хлориду натрію і перемішують (але збовтуючи!), 2-3 рази перевертаючи пробірку.

У деяких випадках не представляється можливим визначення резус-приналежності реципієнта, тоді користуються індивідуальної пробою на резус-сумісність крові донора і реципієнта.

На чашку Петрі наносять 2 краплі сироватки крові хворого і маленьку краплю переливається крові, їх змішують і ставлять на водяну баню (42-45 ° С) на 10 хв. Якщо наступила аглютинація, то кров донора несумісна з кров’ю реципієнта і її переливати не можна.

Трактування результатів . Пробірки переглядають на світло неозброєним оком. При позитивному результаті аглютинація виражається в появі пластівців з склеєних еритроцитів на тлі освітленої рідини.

При негативному результаті рідина в пробірці залишається рівномірно забарвленою, без ознак аглютинації еритроцитів. Результат враховують як істинний після перевірки контрольних, зразків, т. Е.

при позитивному результаті зі стандартними резус-негативними еритроцитами, одногруппной з досліджуваної кров’ю.

ВИЗНАЧЕННЯ резус ПРИЛАДДЯ КРОВІ ЗА ДОПОМОГОЮ Цоліклони

Цоліклони виготовляються з асцитної рідини мишей — носіїв анти-D і анти-С гібридом. Цоліклони Анти-D, Анти-С, Анти-с призначені для визначення резус приналежності крові.

Хід визначення . На планшет індивідуальними піпетками наносяться Цоліклони Анти-D, Анти-С, Анти-с по одній великій краплі (0,1 мл). Поруч з краплями антитіл наноситься по одній маленькій краплі досліджуваної крові (0,01 мл). Кров змішується з реагентом.

Спостерігається хід реакції з Цоліклони візуально при легкому погойдуванні планшета протягом трьох хвилин. Аглютинація еритроцитів з Цоліклони зазвичай настає в перші 3-5 сек.

, Але спостереження слід вести 3 хвилини через більш пізнього появи аглютинації з еритроцитами, що містять слабкі різновиди резус-антигену. При використанні Цоліклони термостатіровать не потрібно,

Інтерпретація результатів . Результат реакції в кожній краплі може бути позитивним або негативним. Позитивний результат виражається в аглютинації (склеюванні) еритроцитів.

Агглютінати видно неозброєним оком у вигляді дрібних червоних агрегатів, швидко зливаються в великі пластівці.

При негативній реакції крапля залишається рівномірно забарвленою в червоний колір, агглютінати в ній не виявляються.

Наявність аглютинації з Анти-D, Анти-С або Анти-с Цоліклони свідчить про те, що кров резус-позитивна, а відсутність аглютинації — що кров резус-негативна.

Вас можуть зацікавіти наші публікації:

Що легко знижує ризик раку голови і шиї? У «Сколково» вперше в світі надрукували на Біопринтер живий органНайден спосіб перемогти рак мозгаКардіохірург-блогер вивів детокс на чисту водуОсновние шкідливі звички, які псують зуби

Визначення резус-фактора крові експрес-методом

Резус-агглютиноген (Rh-фактор) крові не має в плазмі вроджених агглютінінов, однак може бути причиною несумісності крові при повторному її переливанні.

Для роботи необхідно: той же, що і для попередньої роботи і стандартна антирезус сироватка і контрольна сироватка (яка не містить антирезус антитіл).

Хід роботи: На тарілку наносять по одній краплі контрольної сироватки (праворуч -К) і стандартної антирезус сироватки (зліва — Rh). Поряд з кожною сироваткою поміщають по одній краплі досліджуваної крові.

Наступні маніпуляції повинні починатися з контрольної сироватки, але не навпаки (в іншому випадку користуватися одним кінцем палички можна).

Скляною паличкою перемішують краплю крові з краплею сироватки (контрольної), утворюючи загальну краплю діаметром близько 1-1,5 см. Потім таким же чином перемішують кров з антирезус сироваткою. Похитуючи тарілку, спостерігають за реакцією.

Для кращого виявлення наявності або відсутності аглютинації можна додати в обидві проби по краплі фізіологічного розчину.

Якщо досліджувана кров резус-позитивна, то в пробі зі стандартною антирезус сироваткою буде аглютинація еритроцитів (в контролі її бути не повинно). Якщо кров резус-негативна, аглютинація відсутня в обох пробах.

При виникненні аглютинації в пробі з контрольною сироваткою визначення слід повторити, або проводити іншими методами.

Рекомендації до оформлення роботи: Визначити і записати резус приналежність досліджуваної крові. Пояснити значення резус-фактора при переливанні крові.

РОБОТА 7. Спостереження гемолізу еритроцитів. Осмотична резистентність еритроцитів.

Гемолізом називається вихід гемоглобіну в розчин, обумовлений пошкодженням оболонок еритроцитів. При цьому кров стає прозорою, «лакової». Розрізняють декілька видів гемолізу: осмотический, механічний, хімічний, термічний, біологічний.

Осмотический гемоліз, що відбувається в гіпотонічному розчині, пояснюється тим, що вода, проникаючи в еритроцити, в кінцевому підсумку призводить до розриву їх оболонок. Механічний гемоліз спостерігається при тривалих механічних впливах на кров (струшування, здавлювання).

Хімічний гемоліз настає в результаті розчинення білкової або ліпоїдному частини оболонки еритроцитів лугами, спиртом, бензином, ефіром та т. Д.

Термічний гемоліз, який настає при проморожуванні крові, по суті зводиться до механічного пошкодження еритроцитів утворюються в них кристалами льоду.

Біологічний гемоліз настає під впливом специфічних гемолизинов рослинного (сапоніни) або тваринного походження (отрути бджіл, змій, бактерійні токсини, а також гемолізини крові, викликають гемоліз при переливанні несумісної з групової приналежності крові і ін.).

Мета: спостереження осмотичного, хімічного гемолізу еритроцитів. Визначення осмотичної резистентності (стійкості) еритроцитів.

відтворення гемолізу

Для роботи необхідно: пробірки, піпетки місткістю 1 мл, розчин хлориду натрію, капілярна піпетка від гемометра, дефібринованої кров, дистильована вода, нашатирний спирт, 2% розчин сапоніну.

Хід роботи: Чотири пробірки ставлять в штатив і в першу наливають 2 мл фізіологічного розчину, в другу — 2 мл фізіологічного розчину і 5 крапель нашатирного спирту, в третю — 2 мл дистильованої води, в четверту — 2 мл 2% розчину сапоніну. Потім в кожну пробірку додають по 2 краплі крові і струшують пробірки, перемішуючи вміст. Через 30 хвилин спостерігають результати. При наявності гемолізу розчин в пробірці стає прозорим.

Рекомендації до оформлення роботи: Зробити висновок, давши оцінку отриманим результатам. В яких пробірках стався гемоліз, який механізм?

Визначення осмотичної резистентності еритроцитів

Для роботи необхідно: пробірки, піпетки місткістю 1 мл, 1% розчин хлориду натрію, капілярна піпетка від гемометра, дефібринованої кров, дистильована вода.

Хід роботи: Розлити в 10 пробірок, поміщених в штатив. Розчин хлориду натрію в поступово спадному кількості — з 0,6 до 0,15 мл. Потім в кожну з пробірок додати до 1 мл дистильованої води і таким чином отримати розчини хлориду натрію в порядку спадання концентрації, починаючи з 0,6% до 0,15%.

Потім в кожну пробірку додати по краплі крові (кров випускати на стінку пробірки). Пробірки струсити і залишити стояти при кімнатній температурі. Через 1 годину виявляють, що в ряді пробірок еритроцити поступово осіли, а над ними — знебарвлений шар рідини.

Відзначити концентрацію хлориду натрію в тій пробірці, в якій хоча і є осад еритроцитів, але шар рідини над ними трохи забарвлений, що вказує на частковий гемоліз. Ця концентрація хлориду натрію і буде кордоном мінімальної резистентності еритроцитів.

Кордон максимальної резистентності визначають по концентрації розчину хлориду натрію в тій пробірці, в якій вже немає осаду, і рідина інтенсивно забарвлена. Через деякий час в пробірках з гемолизированной кров’ю може утворитися невеликий незабарвлений осад, що складається з строми еритроцитів, що не містять Hb.

Примітка: У здорової людини максимальна резистентність еритроцитів коливається в межах від 0,28 до 0,32, а мінімальна — від 0,52 до 0,48 (цифри позначають відсоток вмісту хлориду натрію в розчині).

Рекомендації до оформлення роботи: Результати досвіду запишіть в зошит. Яке клінічне значення ОРЕ.

Дата додавання: 2023-02-28; переглядів: 402;

Загальний білок (кров)

Кількість загального білку в сироватці залежить головним чином від синтезу і розпаду його двох основних складових – альбуміну та глобулінів. Білки плазми крові синтезуються переважно клітинами печінки і тканинними макрофагами (клітинами, здатними захоплювати та пожирати чужорідні організми і омертвілі тканини). Роль білків крові різноманітна:

• вони зв’язують воду, зберігаючи об’єм крові, не дозволяючи їй залишати судини;
• беруть участь у процесах згортання крові;
• підтримують кислотно-лужний баланс крові;
• з’єднуючись із низкою речовин (холестерин, білірубін і ін.), а також з лікарськими препаратами, доставляють їх до тканин;
• підтримують нормальний рівень таких мікро- і макроелементів, як кальцій, залізо, мідь, магній у крові;
• відіграють найважливішу роль в імунних процесах;
• слугують джерелом амінокислот;
• входять до складу гормонів, ферментів і інших біологічно активних речовин.

При аналізі вмісту загального білку в сироватці крові розрізняють його знижений (гіпопротеїнемію) і підвищений (гіперпротеїнемію) рівень.

Причиною гіпопротеїнемії може бути як недостатнє надходження білку в організм, так і його прискорене виведення, а також порушення утворення білка (особливо при хворобах печінки) або всмоктування (характерно для захворювань кишечнику).

Гіперпротеїнемія нерідко розвивається внаслідок втрати рідини, при гострих інфекціях і деяких злоякісних захворюваннях. Фізичне навантаження також може супроводжуватися підвищенням вмісту білку в сироватці крові.